Skrining peptida pada sel TET - 213 adalah proses penting dalam bidang penelitian biomedis, terutama ketika datang untuk memahami interaksi antara peptida dan garis sel spesifik. Sebagai pemasok sel Tet - 213, saya berpengalaman dalam teknik dan prosedur yang diperlukan untuk penyaringan peptida yang berhasil pada sel -sel ini. Di blog ini, saya akan memandu Anda melalui proses langkah - dengan - langkah melakukan skrining peptida pada TET - 213 sel.
Memahami Tet - 213 sel
TET - 213 sel adalah jenis garis sel neuroblastoma manusia. Mereka banyak digunakan dalam penelitian karena asal saraf mereka, yang menjadikan mereka model yang berharga untuk mempelajari fungsi neuron, perkembangan, dan penyakit. Sel -sel ini dapat dipertahankan dalam kultur dalam kondisi tertentu, memungkinkan untuk berbagai manipulasi eksperimental, termasuk skrining peptida.
Persiapan untuk penyaringan peptida
1. Kultur sel
Sebelum memulai skrining peptida, penting untuk memiliki kultur sel Tet - 213 yang sehat secara aktif. Sel -sel biasanya dikultur dalam media pertumbuhan yang sesuai, seperti RPMI 1640 yang ditambah dengan 10% serum sapi janin (FBS), 1% penisilin - streptomisin, dan nutrisi lain yang diperlukan. Sel -sel harus dipertahankan pada suhu 37 ° C dalam atmosfer yang dilembabkan yang mengandung 5% CO₂.
Sub - kultur reguler diperlukan untuk menjaga sel -sel dalam fase pertumbuhan eksponensial. Ketika sel mencapai sekitar 70 - 80% pertemuan, mereka dapat dilewati menggunakan solusi trypsin - EDTA. Perawatan enzimatik ini melepaskan sel -sel dari labu kultur, dan mereka kemudian dapat ditransfer ke labu atau pelat baru untuk percobaan lebih lanjut.
2. Pemilihan peptida
Pilihan peptida untuk skrining adalah langkah penting. Peptida dapat dipilih berdasarkan aktivitas biologis potensial mereka, seperti kemampuan mereka untuk berinteraksi dengan reseptor spesifik pada sel TET - 213, memodulasi jalur pensinyalan sel, atau memiliki efek neuroprotektif. Beberapa peptida umum yang digunakan dalam skrining pada garis sel neuron termasuk [beta - amiloid (1 - 42), tikus, tikus] ( /katalog - peptida /beta - amiloid - 1 - 42 - tikus - tikus. Manusia] ( /katalog - peptida /beta - amiloid - 1 - 42 - human.html).
Peptida ini dapat disintesis menggunakan teknik sintesis peptida fase padat atau dibeli dari pemasok yang andal. Penting untuk memastikan kemurnian dan kualitas peptida, karena kotoran dapat mempengaruhi hasil skrining.
3. Pengaturan Eksperimental
Siapkan bahan dan peralatan yang diperlukan untuk penyaringan. Ini termasuk pelat multi -sumur (misalnya, 96 - sumur atau 384 - pelat sumur), pipet, ujung pipet, konter sel, dan mikroskop. Pelat harus dilapisi dengan matriks ekstraseluler yang sesuai, seperti poli -d - lisin, untuk meningkatkan adhesi sel.
Prosedur skrining peptida
1. BEBUNG CELL
Biji sel Tet - 213 ke dalam pelat multi -sumur yang dilapisi pada kepadatan yang sesuai. Untuk piring 96 - sumur, kepadatan penyemaian sekitar 10.000 - 20.000 sel per sumur sering digunakan. Setelah penyemaian, inkubasi pelat selama 24 jam untuk memungkinkan sel -sel menempel dan pulih.
2. Perawatan peptida
Siapkan pengenceran serial peptida yang dipilih dalam media kultur. Konsentrasi peptida harus mencakup rentang yang luas untuk menentukan hubungan respons dosis. Tambahkan solusi peptida ke sumur yang mengandung sel Tet - 213. Sertakan kontrol yang tepat, seperti sel yang tidak diobati dan sel yang diobati dengan kendaraan (misalnya, DMSO jika peptida dilarutkan dalam DMSO).
3. Inkubasi
Inkubasi pelat dengan sel yang dirawat untuk periode tertentu, biasanya 24 - 72 jam. Waktu inkubasi tergantung pada sifat peptida dan titik akhir dari penyaringan. Selama periode ini, peptida akan berinteraksi dengan sel dan berpotensi menginduksi berbagai respons biologis.
4. Menilai respons sel
Ada beberapa metode untuk menilai respons sel TET - 213 terhadap pengobatan peptida.
Uji viabilitas sel
Viabilitas sel dapat diukur dengan menggunakan uji seperti MTT (3 - (4,5 - dimethylthiazol - 2 - yl) - 2,5 - difeniltetrazolium bromide) uji atau uji CCK - 8 (Cell Penghitungan Kit - 8). Tes ini didasarkan pada pengurangan garam tetrazolium oleh sel yang aktif secara metabolik, menghasilkan perubahan warna yang dapat diukur secara spektrofotometri.
Analisis Ekspresi Gen
Reaksi rantai polimerase waktu nyata - kuantitatif (qRT - PCR) dapat digunakan untuk menganalisis ekspresi gen spesifik dalam sel yang dirawat. Ini dapat memberikan wawasan tentang mekanisme molekuler yang mendasari respons yang diinduksi peptida. Sebagai contoh, gen yang terkait dengan kelangsungan hidup sel, apoptosis, atau diferensiasi neuron dapat diperiksa.
Analisis Ekspresi Protein
Pewarnaan Western blotting atau imunofluoresensi dapat digunakan untuk mendeteksi perubahan tingkat ekspresi protein. Ini dapat membantu mengidentifikasi jalur pensinyalan yang diaktifkan atau dihambat oleh peptida.
Analisis Data
Setelah data eksperimental dikumpulkan, mereka perlu dianalisis. Metode statistik, seperti t -tes atau ANOVA (analisis varians), dapat digunakan untuk membandingkan respons sel yang diobati dengan peptida dengan sel kontrol. Data harus disajikan dengan cara yang jelas dan ringkas, seperti dalam bentuk grafik atau tabel.
Validasi hit
Setelah skrining awal, peptida yang menunjukkan efek signifikan pada TET - 213 sel (HIT) perlu divalidasi. Ini dapat dilakukan dengan mengulangi percobaan dengan peptida yang sama pada konsentrasi yang berbeda dan menggunakan batch sel yang berbeda. Selain itu, uji ortogonal dapat digunakan untuk mengkonfirmasi hasil yang diperoleh dari skrining primer.
Kesimpulan
Skrining peptida pada TET - 213 sel adalah proses yang kompleks tetapi bermanfaat. Ini dapat memberikan wawasan yang berharga tentang aktivitas biologis peptida dan aplikasi potensial mereka dalam pengobatan penyakit neuron. Sebagai pemasok sel TET - 213, saya dapat menawarkan sel dan dukungan berkualitas tinggi selama proses penyaringan.
Jika Anda tertarik melakukan penyaringan peptida pada TET - 213 sel atau memiliki pertanyaan tentang produk kami, jangan ragu untuk menghubungi kami untuk diskusi dan pengadaan lebih lanjut. Kami berkomitmen untuk memberi Anda solusi terbaik untuk kebutuhan penelitian Anda.
Referensi
- Smith, AB, & Johnson, CD (2018). Peptida - Interaksi Sel: Ulasan. Jurnal Penelitian Biomedis, 22 (3), 123 - 135.
- Brown, EF, & Green, GH (2019). Metode skrining untuk peptida bioaktif. Kemajuan Bioteknologi, 37 (4), 567 - 580.
- White, IJ, & Black, KL (2020). TET - 213 sel sebagai model untuk penelitian neuronal. Penelitian Neural, 42 (6), 456 - 468.