-
Telepon
+86-0755 2308 4243
-
Alamat
Kamar 309, Gedung Meihua, Taman Industri Taiwan, Jalan Songbai No.2132, Distrik Bao'an, Shenzhen, Cina
-
Email
Pertanyaan Umum
Metodologi sintesis apa yang digunakan Biorunstar untuk sintesis peptida?
RE: Biorunstar telah mengembangkan metodologi sintesis fase solusi yang berbeda untuk memenuhi kebutuhan pelanggan. Biasanya, kimia Fmoc fase padat diterapkan.
Bagaimana Anda mengirimkan peptida? Data QC apa yang akan diberikan?
RE: Semua peptida akan dikirim melalui DHL atau FedEx express dalam bentuk bubuk terliofilisasi dalam botol individual yang diberi label dengan baik, pada suhu kamar. Kecuali peptida mentah, yang hanya akan diperiksa dengan spektrometri MALDI-MASS, semua peptida murni sintetik dilengkapi dengan laporan proyek (CoA), data MS, dan data HPLC. akan disediakan lembar data yang berisi karakteristik utama, seperti urutan peptida, kemurnian, kuantitas, modifikasi, data spektrum massa dan data HPLC.
Berapa waktu penyelesaian yang umum untuk sintesis peptida? Berapa lama waktu yang dibutuhkan untuk mengirimkannya kepada saya?
RE: Waktu penyelesaian tipikal kami adalah 2-3 minggu untuk peptida standar yang kurang dari 30 asam amino. Waktu penyelesaian bervariasi tergantung pada panjang, kuantitas, kelarutan dan tingkat kesulitan peptida. Biasanya 3-5 hari untuk menghubungi peneliti di negara lain.
Berapa lama Anda bisa mensintesis?
RE: Biorunstar memiliki pengalaman luas dalam mensintesis peptida panjang, hingga 130aa. Tidak seperti banyak pemasok peptida yang hanya merasa nyaman membuat peptida di bawah 30 atau 40aa, Biorunstar memiliki pengalaman yang baik dalam membuat peptida mulai dari 40aa hingga 90aa. Sulit untuk mensintesis peptida yang panjang, terutama 100aa atau lebih panjang. Jika Anda berencana untuk mensintesis urutan 130aa atau lebih lama, silakan hubungi kami untuk layanan ekspresi dan pemurnian protein khusus.
Bagaimana jika muncul masalah selama proses sintesis atau pemurnian?
RE: Setiap peptida memiliki karakteristik spesifiknya masing-masing. Jika beberapa masalah terjadi selama sintesis di luar perkiraan kami, dan kami tidak dapat mengirimkan peptida Anda tepat waktu, kami akan memberi tahu Anda sesegera mungkin. Jika kami tidak dapat membuat peptida tersebut, Anda tidak akan dikenakan biaya apa pun.
Bentuk garam TFA, bentuk garam Asetat atau HCl: Bentuk mana yang harus saya pilih?
Secara default, peptida disintesis dalam garam TFA. Untuk eksperimen terkait kultur sel atau jaringan, Anda harus mempertimbangkan produksi peptida dalam bentuk garam asetat atau HCl dengan kadar 98% atau lebih tinggi untuk menghindari respons abnormal. Bentuk garam asetat atau HCl dapat diminta dengan biaya tambahan.
Berapa umur simpan peptida?
RE: Peptida stabil minimal satu tahun jika disimpan dalam keadaan terliofilisasi dalam freezer. Jika peptida dilarutkan, umur simpannya mungkin berkurang. Jika peptida mengandung beberapa asam amino reaktif yang dapat dioksidasi seperti Trp, Met, dan terutama Cys, umur simpannya mungkin juga berkurang.
Peptida tersebut mengandung beberapa sistein dan oleh karena itu dapat dengan mudah membentuk ikatan disulfida. Bagaimana cara menghindari hal ini?
RE: Jika rangkaian peptida mengandung beberapa sistein, atau asam amino reaktif lainnya, yang mudah teroksidasi, Biorunstar menawarkan untuk memberikan peptida dengan jejak DTT reduktor kuat. Peptida hanya dikirimkan dengan DTT jika diizinkan secara khusus oleh pelanggan.
Bagaimana cara menyimpan peptida sintetik saya?
RE: Kebanyakan peptida terliofilisasi akan stabil pada suhu kamar selama 2-3 minggu. Untuk penyimpanan jangka panjang, Anda harus menyimpan peptida terliofilisasi pada suhu -20 derajat . Siklus pembekuan-pencairan yang berulang harus dihindari. Biarkan hingga mencapai suhu kamar sebelum dibuka. Umur simpan larutan peptida terbatas; larutan peptida yang telah disiapkan harus digunakan sesegera mungkin.
Berapakah kemurnian peptida mentah dan peptida yang dihilangkan garamnya? Bagaimana cara memurnikan peptida? Apa saja pengotornya?
RE: Untuk peptida pendek dengan urutan normal di bawah 15aa, umumnya 40-60% dengan HPLC untuk kadar kasar; 50-70% oleh HPLC untuk kadar garam yang dihilangkan. Semakin panjang peptidanya, semakin rendah kemurniannya dalam bentuk mentah atau dihilangkan garamnya. Peptida umumnya dimurnikan dengan HPLC menggunakan gradien air dan asetonitril. Sebagian besar pengotor berupa fragmen atau peptida penghapus, peptida yang tidak terlindungi secara sempurna, serta sisa garam dan air.
Penjelasan Kemurnian Peptida dengan HPLC, Kandungan Peptida Total dan Kandungan Peptida Target.
RE: Biorunstar mengirimkan peptida berdasarkan berat kotor bubuk terliofilisasi. Bubuk terliofilisasi mencakup pengotor seperti fragmen atau peptida penghapus, peptida yang tidak terlindungi secara sempurna, TFA dan sisa air. Kemurnian Peptida diukur dengan HPLC. Ini adalah jumlah peptida yang benar relatif terhadap semua analit yang menyerap pada ~214 nm (ikatan peptida menyerap), kemungkinan besar terjadi delesi, pemotongan atau rangkaian deproteksi tidak lengkap, dll. Kemurnian peptida dengan HPLC tidak memperhitungkan air dan garam yang biasanya ada dalam sampel. Kandungan Peptida Total adalah persentase total peptida yang ada relatif terhadap semua yang ada dalam bubuk peptida terliofilisasi. Total kandungan peptida ditentukan oleh analisis kandungan nitrogen. Kandungan Peptida Target dalam bubuk peptida terliofilisasi dengan demikian dapat disimpulkan dengan rumus: Kandungan Peptida Total X Kemurnian Peptida dengan HPLC.
Apa metode pelabelan Fluorescein?
RE: FITC (Fluorescein isothiocyanate) adalah prekursor aktif yang digunakan untuk pelabelan Fluorescein. Untuk pelabelan Nterminal yang efisien, aminoheksanoil tujuh atom
pengatur jarak (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) disisipkan di antara fluorofor (fluoroscein) dan N-terminus peptida. Spacer ini membantu memisahkan fluorofor dari titik perlekatannya, sehingga berpotensi mengurangi interaksi fluorofor dengan biomolekul tempat ia terkonjugasi dan membuatnya lebih mudah diakses oleh reagen pendeteksi sekunder.
pengatur jarak (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) disisipkan di antara fluorofor (fluoroscein) dan N-terminus peptida. Spacer ini membantu memisahkan fluorofor dari titik perlekatannya, sehingga berpotensi mengurangi interaksi fluorofor dengan biomolekul tempat ia terkonjugasi dan membuatnya lebih mudah diakses oleh reagen pendeteksi sekunder.
Apakah pelabelan C-terminal pada Biotin (atau FITC) dapat dilakukan?
RE: Ya. Pelabelan terminal-C pada Biotin (atau FITC) dilakukan dengan penambahan residu Lisin pada terminal-C suatu peptida, dan Biotin (atau FITC) dilekatkan pada rantai samping Lisin melalui ikatan amino. Muatan positif lisin dihilangkan.
Berapa panjang peptida yang tepat untuk produksi antibodi?
RE: Umumnya, peptida residu 10-25 direkomendasikan. Peptida yang lebih panjang dapat memiliki lebih banyak epitop, namun juga memiliki peluang lebih besar untuk membentuk struktur sekunder stabil yang bukan merupakan bentuk asli. Peptida yang lebih pendek (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Apa itu PETA?
RE: MAPS atau Peptida Multi-Antigenik adalah peptida bercabang di mana rantai peptida linier dihubungkan di terminal C melalui inti polilisin, sehingga meningkatkan ukuran keseluruhan molekul. Hal ini dilakukan untuk menghilangkan penggandengan peptida ke KLH. Tampaknya, konformasi peptida pada MAP kurang fleksibel, dan antibodi yang diperoleh MAP biasanya lebih jarang mengenali protein target dibandingkan dengan konjugasi KLH konvensional. Selain itu, tidak ada peptida bebas yang dihasilkan saat membuat MAPS, sehingga sulit untuk menghilangkan antibodi yang diarahkan pada inti polilisin. Pemurnian MAPS dengan HPLC sulit dilakukan, dan MAPS disediakan tanpa verifikasi massal karena heterogenitas dan ukuran molekulnya yang besar.
Mengapa larutan peptida terkonjugasi KLH saya tampak keruh?
RE: KLH atau Keyhole Limpet Hemocyanin adalah protein agregasi besar (MW=4x105 – 1x107). Karena ukuran dan strukturnya, kelarutannya dalam air terbatas sehingga menyebabkan penampakannya keruh. Hal ini tidak akan mempengaruhi imunogenisitas dan larutan keruh dapat digunakan untuk imunisasi.
Bisakah Anda menjelaskan puncak massa M+Na dan M+K dalam spektrum MALDI?
RE: Sangat umum untuk melihat hasil tambahan Na (natrium) dan K (kalium) dalam spektrum MALDI. Natrium dan kalium berasal dari air yang digunakan dalam pelarut peptida. Bahkan air sulingan dan air deionisasi pun memiliki sejumlah kecil ion natrium dan kalium, yang tidak akan pernah bisa dihilangkan seluruhnya. Ini menjadi terionisasi selama proses spesifikasi massa MALDI dan berikatan dengan gugus karboksil bebas dari peptida. Karena tidak ada sistem pemurnian air yang dapat menghilangkan setiap ion natrium atau kalium dari air, melihat penambahan natrium dan kalium pada suatu waktu adalah hal yang sangat umum dan tidak dapat dihindari dalam spesifikasi massa MALDI. Ini bukan merupakan indikasi bahwa peptida tersebut tidak murni, dan juga tidak dapat disamakan dengan berat molekul yang salah.