Permasalahan umum dan solusi dalam proses sintesis peptida meliputi aspek-aspek berikut:
Kandungan peptida: Kandungan peptida mengacu pada persentase zat peptida dalam sampel dibandingkan dengan zat non peptida. Dalam produk peptida, selain peptida itu sendiri, komponen non-garam yang dimasukkan selama proses produksi, seperti air, pelarut yang diserap, ion koordinasi, dan garam, juga disertakan.
Stabilitas kimia:
Reaksi deamidasi: Residu Asn/Gln mudah dihidrolisis membentuk Asp/Glu.
Hidrolisis: Ikatan peptida dalam peptida mudah diputus melalui hidrolisis, terutama yang dibentuk oleh partisipasi Asp, terutama ikatan peptida Asp Pro dan Asp Gly.
Reaksi rasemisasi: Semua residu asam amino kecuali Gly memiliki atom karbon alfa kiral dan rentan terhadap reaksi rasemisasi dalam katalisis basa. Residu asp paling rentan terhadap reaksi rasemisasi.
- degradasi eliminasi: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr dan residu lainnya semuanya dapat terdegradasi melalui - eliminasi, yang lebih mungkin terjadi pada pH basa dan dipengaruhi oleh suhu dan ion logam
Stabilitas fisik:
Denaturasi, adsorpsi, agregasi atau presipitasi: Denaturasi peptida biasanya berhubungan dengan penghancuran struktur tersier dan sekunder. Dalam keadaan terdenaturasi, peptida lebih rentan terhadap reaksi kimia dan aktivitasnya sulit dipulihkan. Zat antara yang terbentuk selama proses denaturasi memiliki kelarutan yang rendah dan rentan terhadap agregasi dan pengendapan
kelestarian:
Kondisi penyimpanan terbaik: Peptida umumnya disimpan dalam bentuk bubuk kering beku, yang sangat stabil pada suhu -20 derajat, terutama setelah pengeringan beku dan disimpan dalam pengering -20 derajat. Kebanyakan peptida dapat disimpan pada suhu ini selama beberapa tahun tanpa perubahan. Untuk mengurangi dampak kelembapan, peptida beku-kering harus dikembalikan ke suhu kamar dalam kondisi kering sebelum terkena udara.
Pengemasan: Bioteknologi Hesheng merekomendasikan pengemasan kecil untuk menghindari siklus pembekuan-pencairan berulang, mengurangi jumlah pembukaan dan penutupan wadah, sehingga mengurangi kemungkinan penanganan yang tidak tepat atau kontaminasi bakteri, dan memastikan stabilitas peptida
Pengujian kemurnian:
Jaminan kemurnian: Semua peptida yang dikirim telah mencapai kemurnian yang disyaratkan, dan peptida yang tidak memenuhi standar akan dibuang. Hasil deteksi HPLC dan MS dapat memverifikasi kemurnian dan berat molekul peptida, sekaligus menampilkan pengotor utama.
Metode deteksi lainnya, seperti analisis asam amino atau analisis unsur, dapat memastikan komposisi asam amino peptida sebagai alat tambahan untuk konfirmasi peptida.
Teknologi sintesis:
Sintesis peptida fase padat: Sintesis peptida fase padat tidak memerlukan pemurnian produk antara, memungkinkan proses sintesis berkelanjutan dan meletakkan dasar untuk otomatisasi sintesis peptida. Berdasarkan sintesis kimia Fmoc, peptida target disintesis dengan menghubungkan secara kovalen gugus karboksil asam amino terminal-C dengan resin polimer yang tidak larut, dan kemudian dimulai dari gugus amino asam amino.
Konten di atas merangkum masalah umum dan tindakan pencegahan dalam sintesis peptida, yang mencakup berbagai aspek seperti stabilitas kimia, stabilitas fisik, kondisi penyimpanan, pengujian kemurnian, dll.