Dalam ranah penelitian dan pengembangan peptida, kemurnian katalog peptida adalah yang paling penting. Sebagai pemasok peptida katalog khusus, kami memahami pentingnya menyediakan produk berkualitas tinggi bagi pelanggan kami. Kadang -kadang, terlepas dari upaya terbaik kami dalam proses sintesis dan pemurnian awal, mungkin ada kebutuhan untuk pemurnian lebih lanjut dari katalog peptida. Di blog ini, kami akan mengeksplorasi berbagai metode dan pertimbangan untuk peptida katalog lebih lanjut saat diperlukan.
Mengapa pemurnian lebih lanjut?
Ada beberapa alasan mengapa pemurnian lebih lanjut dari katalog peptida mungkin diperlukan. Pertama, dalam aplikasi penelitian yang sangat sensitif seperti uji berbasis sel, studi in vivo, atau penelitian biologi struktural, bahkan jejak jumlah kotoran dapat memiliki dampak yang signifikan pada hasil eksperimen. Pengotor berpotensi mengganggu aktivitas biologis peptida, yang mengarah ke positif palsu atau negatif.
Kedua, persyaratan peraturan di beberapa industri, seperti obat -obatan, menuntut tingkat kemurnian yang sangat tinggi untuk peptida yang digunakan dalam pengembangan obat. Jika peptida dianggap sebagai agen terapi potensial, pengotor dapat menimbulkan risiko terhadap keselamatan pasien, dan dengan demikian, langkah -langkah pemurnian tambahan sangat penting.
Metode kromatografi
Reversed - Fase High - Kinerja Cair Chromatography (RP - HPLC)
RP - HPLC adalah salah satu metode yang paling banyak digunakan untuk pemurnian peptida. Ini memisahkan peptida berdasarkan hidrofobisitasnya. Fase stasioner dalam RP - HPLC adalah bahan hidrofobik, biasanya kolom berbasis silika dengan rantai alkil yang terpasang (misalnya, C18 atau C8). Peptida dengan hidrofobik yang berbeda akan berinteraksi secara berbeda dengan fase stasioner, menghasilkan waktu retensi yang berbeda.
Untuk lebih jauh memurnikan peptida katalog menggunakan RP - HPLC, pertama -tama kita harus memilih fase seluler yang sesuai. Fase gerak yang umum terdiri dari campuran air dan pelarut organik seperti asetonitril atau metanol, dengan penambahan sejumlah kecil asam (misalnya, asam trifluoroasetat, TFA) untuk meningkatkan bentuk puncak. Dengan menyesuaikan gradien pelarut organik, kita dapat mengoptimalkan pemisahan peptida target dari kotoran.
Misalnya, jika kita memiliki katalog peptida sepertiLL-37, peptida antimikroba, yang merupakan peptida antimikroba dengan aplikasi terapi potensial, RP - HPLC dapat digunakan untuk menghilangkan sintesis yang tersisa dengan - produk atau fragmen terdegradasi. LL - 37 yang dimurnikan kemudian dapat digunakan dalam uji aktivitas antimikroba yang lebih akurat.
Ion - Pertukaran kromatografi
Ion - Pertukaran kromatografi memisahkan peptida berdasarkan muatannya. Ada dua jenis utama: kation - Exchange Chromatography (CEX) dan Anion - Exchange Chromatography (AEX). Di CEX, fase stasioner memiliki kelompok bermuatan negatif, dan peptida dengan muatan positif bersih akan mengikatnya. Di AEX, fase stasioner bermuatan positif, dan peptida bermuatan negatif akan dipertahankan.
Pilihan antara CEX dan AEX tergantung pada titik isoelektrik (PI) peptida. Jika PI peptida berada di bawah pH fase gerak, peptida akan memiliki muatan negatif bersih dan AEX dapat digunakan. Sebaliknya, jika PI berada di atas pH fase gerak, CEX lebih tepat.
Misalnya,Ureistachykinin II, peptida dengan profil muatan tertentu, dapat dimurnikan lebih lanjut menggunakan kromatografi Ion - Exchange. Dengan dengan hati -hati memilih pH fase gerak dan kekuatan ionik, kita dapat mencapai pemisahan peptida target yang baik dari kotoran bermuatan lainnya.
Metode elektroforesis
Sodium dodecyl sulfate - elektroforesis gel poliakrilamida (SDS - Page)
Meskipun halaman SDS - terutama digunakan untuk analisis protein, ini juga dapat diterapkan pada pemurnian peptida sampai batas tertentu. Dalam halaman SDS - peptida didenaturasi oleh SDS dan dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Peptida bermigrasi melalui gel poliakrilamida di bawah pengaruh medan listrik.
Setelah elektroforesis, gel dapat diwarnai untuk memvisualisasikan peptida. Pita yang sesuai dengan peptida target kemudian dapat dieksisi dari gel, dan peptida dapat dielusi dari matriks gel. Namun, metode ini memiliki beberapa keterbatasan. Proses elusi bisa rumit, dan mungkin ada beberapa kehilangan peptida selama pemurnian. Juga, SDS bisa sulit untuk dihapus sepenuhnya dari peptida yang dimurnikan.
Elektroforesis Kapiler (CE)
Elektroforesis kapiler adalah teknik pemisahan yang kuat untuk peptida. Ini menawarkan efisiensi pemisahan yang tinggi, waktu analisis yang singkat, dan konsumsi sampel yang rendah. CE memisahkan peptida berdasarkan rasio muatannya - terhadap - massa. Ada berbagai mode CE, seperti elektroforesis zona kapiler (CZE), elektroforesis gel kapiler (CGE), dan kromatografi elektrokinetik misel (MEKC).
CZE adalah mode yang paling umum digunakan untuk analisis dan pemurnian peptida. Dalam CZE, peptida dipisahkan dalam kapiler yang diisi buffer di bawah medan listrik. Pemisahan didasarkan pada perbedaan dalam mobilitas elektroforesis peptida. CE dapat digabungkan dengan berbagai metode deteksi, seperti penyerapan UV, fluoresensi, dan spektrometri massa, untuk meningkatkan akurasi identifikasi dan pemurnian peptida.
Pertimbangan lainnya
Kelarutan
Kelarutan peptida merupakan faktor penting dalam proses pemurnian. Jika peptida memiliki kelarutan yang buruk dalam pelarut pemurnian, itu dapat menyebabkan presipitasi selama pemurnian, yang akan mempengaruhi pemulihan dan kemurnian peptida. Untuk meningkatkan kelarutan peptida, kita dapat menyesuaikan pH pelarut, menambah pelarut, atau menggunakan agen pelarut spesifik.
Analisis kemurnian
Setelah pemurnian lebih lanjut, penting untuk menganalisis kemurnian peptida. Metode umum untuk analisis kemurnian termasuk kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC), spektrometri massa (MS), dan resonansi magnetik nuklir (NMR). HPLC dapat memberikan informasi tentang kemurnian kromatografi peptida, sementara MS dapat mengkonfirmasi berat molekul peptida dan mendeteksi kotoran apa pun dengan massa yang berbeda. NMR dapat digunakan untuk menentukan struktur dan kemurnian peptida pada tingkat atom.
Kesimpulan
Sebagai pemasok katalog peptida, kami berkomitmen untuk menyediakan peptida berkualitas tinggi untuk pelanggan kami. Ketika pemurnian lebih lanjut dari katalog peptida diperlukan, kami memiliki berbagai metode yang kami miliki, termasuk metode kromatografi, metode elektroforesis, dan pertimbangan lain seperti kelarutan dan analisis kemurnian. Dengan memilih dengan hati -hati metode pemurnian yang sesuai dan mengoptimalkan kondisi pemurnian, kami dapat memastikan bahwa peptida memenuhi persyaratan kemurnian tinggi pelanggan kami.
Jika Anda memiliki kebutuhan untuk katalog peptida atau memerlukan layanan pemurnian lebih lanjut, jangan ragu untuk menghubungi kami untuk pengadaan dan diskusi. Kami berharap dapat bekerja sama dengan Anda untuk memenuhi kebutuhan penelitian dan pengembangan peptida Anda.
Referensi
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Dolan, JW (2010). Pengantar kromatografi cair modern. Wiley.
- Jorgenson, JW, & Lukacs, KD (1981). Elektroforesis zona kapiler. Kimia Analitik, 53 (8), 1298 - 1302.
- Laemmli, UK (1970). Pembelahan protein struktural selama perakitan kepala bakteriofag T4. Alam, 227 (5259), 680 - 685.